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蛋白質組學和代謝組學 修飾蛋白質組學

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????蛋白質組學的研究的工作不僅聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質表達水平變化,許多至關重要的生命進程不僅由蛋白質相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調控,因而揭示翻譯后修飾發生規律是解析蛋白質復雜多樣的生物功能的一個重要前提。由于蛋白質發生修飾后其分子質量會發生相應的改變,同時質譜能夠精確測定蛋白質或多肽分子質量,根據這一特性,開始將質譜應用于蛋白質翻譯后修飾的鑒定。但由于翻譯后修飾的蛋白質在樣本中含量低且動態范圍廣,檢測前首先需要對修飾蛋白質或肽段進行富集,然后才能進行質譜鑒定。磷酸化涉及到細胞信號轉導,細胞的增殖,發育和分化過程;糖基化在細胞的免疫保護等 生物過程中起重要作用;組蛋白的甲基化和乙酰化與轉錄調節有關…??


應用領域

?????? 疾病機理研究

?????? 個性化醫療

?????? 農業品種改良

?????? 信號轉導途徑分析


技術優勢

??????? 可以針對多種樣本類型;

??????? 可鑒定多種修飾類型;

??????? 可以進行多組樣品比較;

??????? 富集效率高、特異性強;

??????? 定性、定量結果準確.


實驗流程





生信分析

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送樣要求


樣品類型

樣品要求(/組樣品)

備注

蛋白質溶液

蛋白質總量≥300μg

重復實驗則量翻倍,建議準備兩份樣品備用。

組織樣品

樣品總量≥0.1g

按照蛋白質組織提取效率(蛋白:組織=7%)

細胞樣品

細胞數量≥107個

胰酶消化,按細胞凍存標準離心收集細胞即可。

體液樣品

血清≥200μL,腦脊液≥200μL,尿液≥1mL?,淚液≥1mL.

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案例一:血小板抑制相關信號通路研究

????利用iTRAQ蛋白質組學相對定量方法,篩選在血小板激活和抑制生理過程中的主要調節因子的磷酸化修飾差異。在利用伊洛前列素(環前列腺素類似物)治療后,共鑒定了2700個磷酸化肽段,其中360個肽段在刺激過程中表達上調。進而發現血小板抑制是一個多因素的過程,包括了不同激酶和磷酸酶,以及一些其它蛋白質和信號通路的參與




參考文獻:

Beck, F., et al. (2014) Time-resolved characterization of cAMP/PKA-dependent signaling reveals that platelet inhibition is a concerted process involving multiple signaling pathways. Blood 123, e1-e1.

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