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蛋白質組學和代謝組學 定量蛋白質組學 TMT

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? ? 標記定量技術是目前差異蛋白質定量分析方法中通量最高,系統誤差最小,功能最強大的分析方法之一。TMT?(Tandem?Mass?Tag?)是由美國Thermo?Scientific公司研發的一種體外標記技術,可做到10個樣品(10plex)同時標記分析。兩種標記試劑原理類似,可根據實際樣本數量隨意選擇。

??? 技術原理:TMT試劑由三部分組成:報告基團、平衡基團和肽反應基團。報告基團有10種分子量,范圍從126到131Da;平衡基團也有10種不同的分子量,與不同的報告基團搭配,能保證被標記的不同來源的同一肽段在一級質譜中具有相同的質荷比;肽反應基團能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連接使肽段連上標記。

??? 一級質譜中,不同樣品中的同一肽段表現出相同的質荷比;二級質譜中,化學鍵斷裂釋放出報告離子,在質譜低質量區產生了10個報告離子峰,其強度反應了該肽段在不同樣品中的相對表達量信息,另外二級質譜中的肽段碎片離子峰質荷比反應了該肽段的序列信息。這些質譜原始數據經過數據庫檢索,可得到蛋白質的定性和相對定量信息。


適用范圍

?? 1) 機理和調控機制研究?

?? 2) 動態過程中機制研究?

?? 3) 疾病標志物的篩選?

?? 4) 用藥及預后標志物篩選


技術優勢

?? 1)?高通量:可同時對2-10組樣本進行分析;②?高重復性:樣本混合上機,消除了系統誤差;

?? 2)?體外標記技術,適用于大部分生物樣本的蛋白質差異分析:胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;

?? 3)?分離能力強,分析范圍廣,可對任何類型的蛋白質進行分離鑒定,包括高分子量、酸性和堿性蛋白等。


實驗流程


生信分析

送樣要求


樣品類型

樣品要求(/組樣品)

備注

蛋白質溶液

蛋白質總量≥300μg

重復實驗則量翻倍,建議準備兩份樣品備用。

組織樣品

樣品總量≥0.1g

按照蛋白質組織提取效率(蛋白:組織=7%)?按照蛋白質組織提取效率(蛋白:組織=7%)

細胞樣品

細胞數量≥107個

胰酶消化,按細胞凍存標準離心收集細胞即可。

體液樣品

血清≥200μL,腦脊液≥200μL,尿液≥1mL?,淚液≥1mL.



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論壇

TMT蛋白質組學研究認知功能下降的突觸標記神經退行性疾病


主要結果:




 

參考文獻:

Erika Bereczki, Rui M. Branca, Paul T. Francis, et al., Synaptic markers of cognitive decline in neurodegenerative diseases: a proteomic approach. Brain 2018: 141; 582–595. doi:10.1093/brain/awx352

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